【作 者】：网站采编
【关键词】：
【摘 要】：2.8 Western Blot检测IL-17信号通路关键分子的蛋白表达 3 统计学方法 结果 1 续苓健骨方含药血清对Raw264.7细胞活性的影响 2 破骨细胞的诱导和分化 3 不同体积分

        2.8 Western Blot检测IL-17信号通路关键分子的蛋白表达

    3 统计学方法

结果

    1 续苓健骨方含药血清对Raw264.7细胞活性的影响

    2 破骨细胞的诱导和分化

    3 不同体积分数含药血清对破骨细胞分化标志基因的影响

    4 含药血清对破骨细胞分化的影响

    5 IL-17信号通路关键分子m RNA表达

    6 IL-17信号通路关键分子蛋白表达

讨论

    1 破骨细胞的诱导分化及鉴定

    2 续苓健骨方含药血清对破骨细胞的抑制作用

    3 续苓健骨方含药血清对IL-17信号通路的作用

    4 小结

创新与不足

结论

参考文献

附录

文献综述 补肾活血法治疗原发性骨质疏松症的研究进展

参考文献

致谢

作者简历

文章摘要:目的观察续苓健骨方治疗肾虚血瘀型绝经后骨质疏松症的临床疗效;通过转录组学的研究和体内外实验验证续苓健骨方对IL-17信号通路关键分子IL-17RA、Act1、FOSB的影响以探讨其作用机制。方法1.以肾虚血瘀型绝经后骨质疏松症患者为研究对象,随机分为试验组35例和对照组32例。在口服葡萄糖酸钙片的基础上,试验组给予续苓健骨颗粒,对照组给予骨化三醇胶丸,疗程6个月。记录两组治疗前后的中医证侯积分、骨密度、骨代谢及安全性指标。2.采集试验组6例患者治疗前后和无骨质疏松症正常组6例的外周血样本,运用转录组学的测序技术筛选差异基因并进行富集分析。实时荧光定量PCR检测试验组27例治疗前后和无骨质疏松症正常组27例外周血中IL-17信号通路关键分子IL-17RA、Act1、FOSB的m RNA表达。3.选择3月龄雄性SD大鼠进行含药血清的制备;采用破骨细胞前体细胞株Raw264.7进行破骨细胞的诱导分化,实时荧光定量PCR检测破骨细胞分化标志基因CTSK、TRAP、MMP-9的m RNA表达;使用含药血清和通路抑制剂（17-AGG）进行干预,分为对照组、抑制剂组、含药血清+抑制剂组、空白血清组、含药血清组,在干预24h、48h、96h后提取五组细胞RNA和蛋白,实时荧光定量PCR和Western-blot分别检测IL-17信号通路关键分子IL-17RA、Act1、FOSB的m RNA和蛋白表达。结果1.试验组入组35例,脱落8例,完成27例;对照组入组32例,脱落5例,完成27例。两组治疗后中医证候积分均显著下降,差异有统计学意义（P＜0.05）,但组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）;中医证候疗效总有效率比较,试验组优于对照组（P＜0.05）;两组骨密度组间、组内比较差异均无统计学意义（P＞0.05）;骨代谢指标组间比较、试验组组内比较差异均无统计学意义（P＞0.05）,但试验组治疗后PINP上升,CTX下降。两组均未见严重不良反应。2.试验组治疗前与无骨质疏松症正常组共筛选出598个差异基因,治疗前后共筛选出319个。比较598个和319个差异基因,共19个共同差异基因包括FOSB、H4C2、RAMP3等。通路富集分析发现只有FOSB基因富集在IL-17信号通路上。与试验组患者相比,正常组IL-17RA m RNA表达较低,但差异无统计学意义（P＞0.05）,Act1 m RNA表达明显较低,而FOSB m RNA表达则明显较高（P＜0.05）。与治疗前比较,治疗后IL-17RA、Act1 m RNA表达均降低,但差异无统计学意义（P＞0.05）;而FOSB m RNA表达明显升高（P＜0.05）。3.与对照组相比,含药血清组干预后破骨细胞分化成熟数目明显减少且分化标志基因CTSK、TRAP、MMP-9 m RNA表达明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。与对照组相比,抑制剂组、含药血清组IL-17RA、Act1 m RNA和蛋白的表达均有出现下降（P＜0.05）;与空白血清组相比,含药血清干预后IL-17RA、Act1 m RNA和蛋白表达均较低但差异无统计学意义（P＞0.05）;与含药血清组比较,含药血清+抑制剂组IL-17RA、Act1蛋白的表达出现下降但差异无统计学意义（P＞0.05）。同样,与对照组相比,抑制剂组FOSB m RNA和蛋白的表达也出现下降（P＜0.05）,含药血清组m RNA表达升高,但蛋白表达的变化却无统计学意义（P＞0.05）。结论1.续苓健骨方能够缓解肾虚血瘀型绝经后骨质疏松症患者中医临床症状,对骨密度的疗效与骨化三醇胶丸相当,且能改善骨代谢指标,安全性较好。2.转录组学的分析结果表明,续苓健骨方的治疗机制可能与调节IL-17信号通路相关基因的表达有关。3.续苓健骨方可影响患者外周血IL-17信号通路关键分子IL-17RA、Act1、FOSB m RNA的表达;同时续苓健骨方含药血清能够抑制破骨细胞的分化,其作用机制与调节IL-17信号通路相关基因表达,抑制下游信号的传导有关。

文章来源：《中国骨质疏松杂志》 网址: http://www.zggzsszzbjb.cn/qikandaodu/2022/0928/1131.html